2012年1月2日 星期一

比較野生樟芝與實驗室人工栽培樟芝活性功效之研究

張懿欣 中山醫學大學 醫學檢驗暨生物技術學系


樟芝(Antrodia camphorata)是台灣特有褐腐菌,只能生長在常綠闊葉樹-牛樟(Cinnamomum kanehirae hay)的內壁。樟芝氣味芳香、味辛苦,子實體富含多醣體與三萜類等成分,有抗B型肝炎與防癌等功效。基於其功效以及野生樟芝子實體數量極少,加上人工栽培不易等因素,所以價格昂貴;業者往往為了採取野生樟芝而大肆盜伐牛樟樹,使臺灣特有珍貴樹種瀕臨滅絕、破壞森林多樣性與生態平衡。

本實驗室執行95-96年度中醫藥委員會「藥用植物資源開發研究類」委託計畫”樟芝栽培與其抗癌活性之研究” (CCMP95-TP-044)已有優良研究成果,不但已建立牛樟芝的人工栽培條件與技術,並證實在實驗室人工栽培之牛樟芝具有抗腫瘤細胞生長與誘發細胞凋亡作用的活性。

本年度計畫結合跨校之林農業與醫學生物技術學者的專長與跨校單位間人員之良好合作模式與默契,以執行95-96年度計劃既有之成果、經驗與實驗技術內容為根基,利用動物模式分析比較野生樟芝與本實驗室自行栽培樟芝的活性,選殖富含活性成分之菌種與建立人工栽培方式,確立可大量生產富含活性成分樟芝之人工栽培法,研發藥用樟芝之抗癌活性相關保健產品。

本研究計畫之目標符合推動傳統藥材生技研發類之研究重點2-2:中草藥品質之確保研究(3)野生與栽培藥材藥效比較之研究。實驗結果顯示不論是發酵液、水萃液或甲醇萃取液等3種自行培育之樟芝萃取液都具有抑制小鼠腫瘤生長之活性,其抑癌活性依序為發酵液、甲醇萃取物與水萃物。

另外,野生樟芝水萃液與甲醇萃取液也都具有抑制腫瘤生長活性,其中以高濃度樟芝甲醇萃取液抑制效果較佳。以上結果證實本實驗自行人工栽培樟芝的抑制腫瘤效果可媲美野生樟芝,甚而人工栽培樟芝培養過程中產生之發酵液的抑癌效果比野生樟芝更為顯著,所需劑量也較低。另外,餵食野生樟芝水萃取液4週的小鼠,其血清IL-6的濃度比起餵食1週及2週的小鼠顯著增加;推測野生樟芝水萃液可能透過提升IL-6分泌量誘發發炎反應來抑制癌細胞的生長。

未來將根據上述研究成果,進行人工培養及篩檢研發符合市場需求的樟芝保健產品,符合社會大眾與市場需求以及推動推廣中草藥產業之目標。更可有效遏止盜伐,挽救臺灣特有珍貴樹種牛樟樹避免瀕臨滅絕。

關鍵字:樟芝、人工栽培、抗癌活性、活性比較

http://www.ccmp.gov.tw/

以動物實驗評估丹參及丹參酮ⅡA的作用二

蘇進成 財團法人佛教慈濟綜合醫院


丹参是民眾常服用的藥物,用在心血管疾病,肝炎,婦女經痛等。丹参酮ⅡA在我們先前研究發現,在體外透過不同的分子機轉,有抗大腸癌,肺癌及乳癌的作用。為了日後臨床應用,本研究計畫,探討丹参和丹参酮ⅡA是否有肝臟毒性。實驗使用體重約25至30公克的雄性白小鼠(NMRI mice),飼養於慈濟大學動物中心。實驗一是探討小鼠暴露丹參及丹參酮IIA後,對 GOT、GPT、SOD和CAT的活性和CAT含量的改變 。實驗共分為兩部份。第一部份:低劑量:小白鼠18隻,分為控制組(玉米油)、丹參 0.2 g/kg 及丹參酮IIA 40 mg/kg 三組,連續餵食五天,在第六天分別給予犧牲。第二部份:高劑量:小白鼠18隻,分為控制組(玉米油)、丹參 1 g/kg 及丹參酮IIA 200 mg/kg 三組,連續餵食五天,在第六天分別給予犧牲。抽血檢測肝功能指數,並做組織病理切片,再測定肝臟組織中SOD、GPx、CAT的活性和CAT含量,並用西方點墨法檢測蛋白表達。

由結果可知,不論高劑量或是低劑量的丹參酮IIA對於肝功能生化檢驗指標GOT/AST與GPT/ALT的變化,並沒有統計上的意義。從結果可以得知,服用低劑量與高劑量丹參與丹參酮IIA對於膽紅素代謝也沒有顯著變化。而服用低劑量丹參酮IIA可以提高CAT的含量,並且可以提高其活性。

服用高、低劑量的丹參與高劑量丹參酮IIA,對於過CAT的含量與活性沒有顯著變化。服用高劑量丹參會使SOD的活性明顯下降,而服用高劑量丹參酮IIA則是略為下降。在服用低劑量的丹參、丹參酮IIA卻可以略微的提高SOD的活性。另外顯示服用低劑量的丹參酮IIA可以使GPX活性增加。

然而服用低劑量的丹參對於GPX活性的變化,卻沒有統計學上意義。但是服用高劑量的丹參和丹參酮IIA都會抑制GPx的活性。經過肝臟病理切片診斷,發現肝臟有出現明顯的輕度充血現象。不論低或高劑量都會使輕度充血現象出現,但是高劑量的丹參充血程度是比低劑量來的高。

在短期服用丹參與丹參酮IIA後,發現肝臟有出現肝細胞輕度水腫現象,丹參酮IIA不論低或高劑量都會使水腫現象出現,但是高劑量的丹參會引起較高的肝細胞輕度水腫程度,低劑量丹參不會。服用低劑量的丹參酮IIA對於肝臟是有幫助的。

肝功能指標GOT與GPT不受藥物所影響,總膽紅素與直接膽紅素也沒有受到影響,在病理診斷部分,丹參酮IIA會造成充血,但是在切片中並沒有發現有壞死細胞的出現。服用低劑量的丹參酮IIA,可以提高過氧化氫酶(CAT)的活性與含量,可以提高超氧歧化酶(SOD)活性與提高麩胱甘肽過氧化酶(GPx),這些結果都顯示著低劑量的丹參酮IIA對於肝臟抗氧化能力是頗有幫助的。


關鍵字:丹參,丹參酮IIA,肝臟毒性,動物實驗

http://www.ccmp.gov.tw/

以動物實驗評估丹參及丹參酮ⅡA的作用二

蘇進成 財團法人佛教慈濟綜合醫院


丹参是民眾常服用的藥物,用在心血管疾病,肝炎,婦女經痛等。丹参酮ⅡA在我們先前研究發現,在體外透過不同的分子機轉,有抗大腸癌,肺癌及乳癌的作用。為了日後臨床應用,本研究計畫,探討丹参和丹参酮ⅡA是否有肝臟毒性。實驗使用體重約25至30公克的雄性白小鼠(NMRI mice),飼養於慈濟大學動物中心。實驗一是探討小鼠暴露丹參及丹參酮IIA後,對 GOT、GPT、SOD和CAT的活性和CAT含量的改變 。實驗共分為兩部份。第一部份:低劑量:小白鼠18隻,分為控制組(玉米油)、丹參 0.2 g/kg 及丹參酮IIA 40 mg/kg 三組,連續餵食五天,在第六天分別給予犧牲。第二部份:高劑量:小白鼠18隻,分為控制組(玉米油)、丹參 1 g/kg 及丹參酮IIA 200 mg/kg 三組,連續餵食五天,在第六天分別給予犧牲。抽血檢測肝功能指數,並做組織病理切片,再測定肝臟組織中SOD、GPx、CAT的活性和CAT含量,並用西方點墨法檢測蛋白表達。

由結果可知,不論高劑量或是低劑量的丹參酮IIA對於肝功能生化檢驗指標GOT/AST與GPT/ALT的變化,並沒有統計上的意義。從結果可以得知,服用低劑量與高劑量丹參與丹參酮IIA對於膽紅素代謝也沒有顯著變化。而服用低劑量丹參酮IIA可以提高CAT的含量,並且可以提高其活性。

服用高、低劑量的丹參與高劑量丹參酮IIA,對於過CAT的含量與活性沒有顯著變化。服用高劑量丹參會使SOD的活性明顯下降,而服用高劑量丹參酮IIA則是略為下降。在服用低劑量的丹參、丹參酮IIA卻可以略微的提高SOD的活性。另外顯示服用低劑量的丹參酮IIA可以使GPX活性增加。

然而服用低劑量的丹參對於GPX活性的變化,卻沒有統計學上意義。但是服用高劑量的丹參和丹參酮IIA都會抑制GPx的活性。經過肝臟病理切片診斷,發現肝臟有出現明顯的輕度充血現象。不論低或高劑量都會使輕度充血現象出現,但是高劑量的丹參充血程度是比低劑量來的高。

在短期服用丹參與丹參酮IIA後,發現肝臟有出現肝細胞輕度水腫現象,丹參酮IIA不論低或高劑量都會使水腫現象出現,但是高劑量的丹參會引起較高的肝細胞輕度水腫程度,低劑量丹參不會。服用低劑量的丹參酮IIA對於肝臟是有幫助的。

肝功能指標GOT與GPT不受藥物所影響,總膽紅素與直接膽紅素也沒有受到影響,在病理診斷部分,丹參酮IIA會造成充血,但是在切片中並沒有發現有壞死細胞的出現。服用低劑量的丹參酮IIA,可以提高過氧化氫酶(CAT)的活性與含量,可以提高超氧歧化酶(SOD)活性與提高麩胱甘肽過氧化酶(GPx),這些結果都顯示著低劑量的丹參酮IIA對於肝臟抗氧化能力是頗有幫助的。


關鍵字:丹參,丹參酮IIA,肝臟毒性,動物實驗

http://www.ccmp.gov.tw/

以動物實驗評估丹參及丹參酮ⅡA的作用一

蘇進成 花蓮佛教慈濟綜合醫院


從中醫傳統理論,丹参入肝、心二經,有活血化瘀,寬胸止痛的功效,臨床用在心臟冠狀動脈疾病、心絞痛、心肌梗塞及急、慢性肝炎。另有一味丹参,功同四物之說,也用在婦科痛經疾病。丹参酮ⅡA是丹参的成份之一,在先前實驗結果顯示有抗癌作用,但尚未在臨床應用。為日後臨床試驗作準備,進行動物實驗,確認丹参酒粹物和丹参酮ⅡA有無肝毒性及對抗氧化酶SOD、CAT和GPx的影響。

本實驗選用小白鼠(NMRI mice,此品系為慈濟大學實驗動物中心所繁殖小鼠)。隨機選用雄性,3~4周齡,體重15 ~ 20 公克左右的NMRI mice 共48隻。實驗二 18隻分成3組每組6隻,分別為控制組、丹參酮IIA組、丹參-酒精萃取物組。小白鼠暴露丹參乙醇萃取物(1 g/kg/day))、丹參酮IIA(200 mg/kg/day)五天後,在停止暴露七天
後,給予犧牲,抽血檢測肝功能指數(GOT、GPT、Bilirubin total/direct),並做組織病理切片,確認有無肝損傷,再測定肝臟組織中SOD、GPx、CAT的活性和CAT含量。實驗三 30隻分成3組每組10隻,分別為控制組、丹參酮IIA組、丹參-酒精萃取物組。讓NMRI小鼠暴露在丹參酒萃物(1g/kg/day )、丹參酮IIA(200 g/kg/day)每週五天,連續給藥八週,並停止服藥四週後犧牲,,抽血檢測肝功能指數(GOT、GPT、Bilirubin total/direct),並做組織病理切片,確認有無肝損傷,再測定肝臟組織中SOD、GPx、CAT的活性和CAT含量。

本實驗結果顯示丹参酒粹物及丹参酮ⅡA無論短期(五天)使用或長期(八週)使用,皆不會造成肝臟在病理學上的病理變化。對抗氧化酶(SOD、CAT 和 GPx)的影響方面,丹参酒粹物在短期(五天)使用,雖會稍微降低抗氧化酶的活性,但停用七天後抗氧化酶(GPx、CAT)的活性就恢復正常且稍微提高,只有抗氧化酶(SOD)的活性稍微降低
,而長期(八週)使用後停藥四週抗氧化酶(SOD)的活性就恢復正常水準且稍微提高抗氧化酶(GPx、CAT)的活性。丹参酮ⅡA在短期(五天)使用,雖會稍微降低抗氧化酶的活性,但停用七天後抗氧化酶(GPx)的活性就恢復正常,甚致提升抗氧化酶(CAT)的活性,而長期(八週)使用後停藥四週抗氧化酶的活性就恢復正常水準且稍微提高(SOD、CAT),甚致可大幅提升抗氧化酶(GPx)的活性。實驗結果,顯示丹参酒粹物及丹参酮ⅡA在動物體內確認不會造成肝臟實質病理變化,也沒有造成肝指數(GOT、GPT、Bilirubin Total and Direct)的異常,且長期(八週)使用後,停藥四週,抗氧化酶的活性就恢復正常水準或稍微提高(SOD、CAT),丹参酮ⅡA甚致可大幅提升抗氧化酶(GPx)的活性。所以傳統中醫將丹参列在上品藥,應是古代醫家臨床長期使用的觀察心得。本實驗結果,顯示丹参酒粹物及丹参酮ⅡA在動物體內都沒有造成肝毒性,印證傳統中醫的理論。

關鍵字:丹參,丹參酮IIA,肝臟毒性,動物實驗

http://www.ccmp.gov.tw/

八段錦對於紅斑狼瘡患者自律神經平衡之臨床療效評估

黃升騰 長庚醫療財團法人高雄長庚紀念醫院

研究目的
本研究的目的,係針對紅斑狼瘡的病人,經八段錦的練習之後:
(1)測量患者各種生物活性指標(C3、C4、ANA、dsDNA、SLEDAI、CBC、U/A),比較練習前後的差異。
(2)觀察患者練習前後自律神經的變化。
(3)其重要性乃在於提供八段錦對於紅斑狼瘡患者,臨床輔助治療上醫學參考的依據,及建立有效及安全性管理機制。

研究方法
一、 中醫門診及風濕免疫科門診中徵得受試者,本研究經長庚醫院醫學倫理委員會同意,並簽署受試者同意書。共收集60位受試者。
二、 納入標準:年齡介於18-60歲正常人及SLE 非住院病患
三、 排除標準:
(1) 住院病患
(2) 合併其他疾病,如DM, hypertension, cardiac diseases 及 thyroid diseases
四、 分組標準
(A) 空白(A)組:正常人組30人,接受八段錦練習至少一個月以上,每週至少3次,每次30分鐘。
(B) SLE(B)組:SLE患者30人,接受八段錦練習至少一個月以上,每週至少3次,每次30分鐘。
五、 操作原則:
(1)八段錦練習包括文八段與武八段約須45~50分鐘,練完後我們會請受試者站樁約10分鐘,每次練習約一個小時左右,一週三次。
(2) 告知每一位受測者於測試的前一天,需有充分的睡眠,且於24小時內不得喝酒,喝茶,吸煙等影響自律神經的因子,分別於以下時間點接受心電圖訊號的記錄(EZ-ECG300,OkiiMura Inc. Taiwan)以做為後續心率變異度分析之用。每一位受試者,於下述(1)(2)條件時,接受HRV測試,皆須於安靜寬敞的空間下,休息30分鐘後,方開始接受心電圖訊號的記錄。
1. 未接受八段錦訓練前。
2. 未做八段錦運動前。(一個月後)
3. 八段錦運動完後30分鐘。 (一個月後)
4. 八段錦運動完後60分鐘。 (一個月後)
(3) B組患者於測試前及練功1個月後,分別抽血檢測C3、C4、Albumin, Creatinine、ANA、anti- dsDNA、urine routine。
(4) B組患者於測試前及練功1個月後,記錄SLEDAI (systemic lupus erythematosus disease ctivity index)。

結果與討論

經過約一年的收案正常人組收案29例,尚有一位未完成。發現正常人組經過八段錦的練習後在時域變化上mean值隨著人數增加後p值小於0.01,而SD與CV值隨著練完八段錦後30及60分鐘時,與未練八段錦前,並無統計上的意義。就SLE組方面,迄今共完成收案21例,尚有4位未完成。基本上SLE患者在來練功前,在時域與頻域的分析上均較正常人組為低,其結果與過去我們的報告相符合。SLE患者經過八段錦練功一個月後,各種抽血檢查及SLEDAI Score,前後之間亦無明顯的變化,其可能的原因與練習時間不夠可能有關,但八段錦練過一個月後,我們發現時域的變化不大,並無統計學上的變化。但在頻域的變化上,可看出一些端倪,結果顯示,副交感神經的活性於練功完後半小時,高頻有明顯增加,達統計上的意義P<0.05(P=0.032),表示八段錦對於SLE患者有提升副交感活性的趨勢,當收案增加時,P值就可能有更顯著性的差異,至於交感神經活性及交感副交感神經活性平衡目前仍未看出有任何顯著性的差別。

未來我們將繼續觀察八段錦是否能有效改善SLE患者血液流變學上的變化,檢視SLE患者經八段錦練習後,觀察是否可以改善血管彈性,周邊血流順暢,及血管內液充足度,同時亦可與前一研究自律神經系統變化作一相關比較。藉由此一科學化的研究,進一步闡明八段錦可否作為SLE患者的輔助性治療。

關鍵字:紅斑狼瘡,八段錦,自律神經,心律變異度

http://www.ccmp.gov.tw/

中醫認證制度於世界各國之現況調查

葉美玲 國立台北護理學院


本研究計畫旨在調查與分析國際接受傳統醫學之現況。第二階段研究計畫(2008年1~12月)針對美國、德國、英國、澳大利亞等國家,進行資料收集與分析,採用描述性研究法分析,以期瞭解各國在中醫認證制度及相關配套措施之推展情形。本研究計畫已完成之項目,登錄表之再修正,敦請相關領域專家,針對研發之登錄表進行效度檢定、內容審查,依據專家建議進行修改。相關資料收集,收集美、德、英、澳大利亞等國家之傳統醫學現況、政策、法規、臨床實務、教育、認證等資料。登錄資料之分析歸類以一位登錄者與一位評定員者分別進行相互同意度之信度檢測。

資料分析應用描述性統計分析方法,分析美國、德國、英國、澳大利亞等國家之傳統醫學政策、法規、臨床實務、教育、認證等資料。本研究計畫之調查結果,可以提供中醫專業之發展現況與趨勢,能增進醫護人員對傳統/互補醫學之學習與認識。

建議未來進一步調查分析其他傳統/互補醫學療法之發展現況與相關證照。

關鍵字:傳統醫學、實務、教育、政策、證照

龍膽瀉肝湯對紅斑性狼瘡小鼠之調控機制研究

李宗諺 長庚大學

全身性紅斑性狼瘡是一種慢性、多器官侵蝕、系統的發炎性,它和免疫系統失調及廣泛性地免疫複合體沈積有關,同時可以見到細胞激素和發炎細胞共同產生的炎症反應。其病理機轉最主要是導因於身體所產生不同種類的自體抗體,以致於造成身體各個系統及器官的功能喪失會危及生命的疾病。

龍膽瀉肝湯是中醫臨床最常用的清熱瀉火劑之一,原為瀉肝膽實火、清下焦溼熱而設,但目前所使用的範圍則越來越廣,既廣被報導具有抑制脂質過氧化的作用,又兼具免疫調節的功能,但真正在實驗性紅斑性狼瘡的作用機制卻一直缺乏科學性的探討。

本計劃以MRL lpr/lpr小鼠為自發性的自體免疫疾病動物模式,小鼠在長大的過程中會出現類似人類全身性紅斑性狼瘡的症狀。實驗動物與以餵食龍膽瀉肝湯與龍膽草正丁醇萃取物二週後,收集血液與腎臟組織進行病理檢驗與免疫分析。實驗結果發現,龍膽瀉肝湯可以降低紅斑性狼瘡小鼠體內的氧化壓力,也確實改善了紅斑性狼瘡小鼠外觀脫毛潰爛發炎的現象。龍膽瀉肝湯對改善MRL小鼠有嚴重的腎膈增生,腎臟組織IgG染色沉積較輕。蛋白質體研究各組間有變化的標誌蛋白與腎臟滲透壓調控有密切的關係。有趣的是龍膽瀉肝湯治療後整個腎臟組織氧化壓力下降,抗氧化能力明顯提升。MRL小鼠呈現明顯的脾臟腫大的現象,餵食龍膽瀉肝湯的小鼠脾臟明顯縮小,我們分析此作用與脾臟中調節性T細胞的表現有關。這項優勢也表現在龍膽瀉肝湯介入紅斑性狼瘡小鼠MRL-lpr/lpr治療,顯著降低血中Anti-dsDNA、TNF-α與IFN-γ的濃度。上述之研究結果在龍膽草正丁醇萃取物餵食組有類似的表現。藉由此研究,我們希望能進一步評估龍膽瀉肝湯具有治療人類全身性紅斑性狼瘡的潛力。


關鍵字:龍膽瀉肝湯,紅斑性狼瘡,調節性T細胞

http://www.ccmp.gov.tw/